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產品名稱:

豬瘟病毒(CSFV)熒光PCR核酸檢測試劑盒

產品型號: 產品時間: 2023-07-05
豬瘟病毒(CSFV)熒光PCR核酸檢測試劑盒適用于檢測的扁桃體、淋巴結等組織病變部與健康部交界處組織、全血等標本中豬瘟病毒 RNA,適用于豬瘟病毒感染的輔助診斷。其檢測結果僅供參考。
本試劑盒用一對豬瘟病毒特異性引物,結合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術對豬瘟病毒 RNA 進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

產品概述

豬瘟病毒(CSFV)熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書

【產品名稱】

商品名稱:豬瘟病毒(CSFV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)

Name :Diagnostic Kit for Classical Swine Fever Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48 份/盒

【預期用途】

本試劑盒適用于檢測的扁桃體、淋巴結等組織病變部與健康部交界處組織、全

血等標本中豬瘟病毒 RNA,適用于豬瘟病毒感染的輔助診斷。其檢測結果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒用一對豬瘟病毒特異性引物,結合一條特異性熒光探針,用一步法熒

光 RT-PCR 技術對豬瘟病毒 RNA 進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的

病原學診斷。

【試劑組成】

名 稱 規(guī) 格

酶液 50μl×1 管

CSFV 反應液 1.0ml×1 管

CSFV 陽性質控品 50μl ×1 管

陰性質控品 250μl ×1 管

說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融少于 5 次,

有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ

Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】

病死或撲殺的豬,取扁桃體、淋巴結等組織病變部與健康部交界處組織;待檢活

豬,用注射器取血 5mL。

【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標

本運送應采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1樣本前處理

每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,手術剪剪碎混勻后取 0.05g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100uL 于 1.5mL 滅菌離心管中;全血樣品待血凝后取血清 100uL,置 1.5mL 離心管中。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取法),請按照試劑盒說明書進行操作。

2. 試劑配制(試劑準備區(qū))

根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性

對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

試劑 CSFV 反應液 酶液

用量 20μl 1μl

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μl,分別加入相應的反

應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴增(核酸擴增區(qū))

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;

4.2設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25ul;熒光通道選擇:

檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿

選擇 ROX 參比熒光。

4.3推薦循環(huán)參數設置:

步驟 循環(huán)數 溫度 時間 收集熒光信號

1 1cycle 42℃ 20min 否

2 1 cycle 95℃ 10min 否

3 40 cycle

94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 結果分析判定

5.1結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲

線出現(xiàn)整體傾斜時,根據分析后圖像調節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范圍內調節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節(jié)),以及 Threshold 的 Value

值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

5.2結果判斷

陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數增長曲線;

可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct

值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測結果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

7. 質控標準

陰性質控品:無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示;

陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且 Ct 值≤32;

以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

8. 產品性能指標

陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率

為 100%。

低檢測限:5.0×102copies/ml。

精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。

2111-48牛腺病毒3型(BAV-3)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)
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1011-48異嗜性小鼠白血病病毒(X-MuLV)核酸檢測(熒光-PCR法)
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1211-48兔出血癥病毒2型(RHDV-2)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)
1411-48塞尼卡谷病毒(SVV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

【注意事項】

Ø 所有操作嚴格按照說明書進行;

Ø 試劑盒內各種組分使用前應自然融化,*混勻并短暫離心;

Ø 反應液應避光保存;

Ø 反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

Ø 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)工作服;

Ø 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;

Ø 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

Ø 試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全

通則》進行處理。

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